Использование методики влагалищных мазков для наблюдения половых циклов у собак
Заслуженный эксперт России кандидат биологических наук А.Э. Айрапетян
В предлагаемой вниманию собаководов небольшой статье я хочу остановиться на способах определения оптимальных сроков вязки суки по методике влагалищных мазков. Методика основана на том, что каждой стадии полового цикла самок млекопитающих соответствует определенная клеточная картина влагалищных выделений. Эта методика была разработана в 1917 году Стоккардом и Папаниколау на грызунах и позднее стала широко использоваться для всех групп млекопитающих со спонтанным (самопроизвольным) типом овуляции. Она нашла широкое применение в клеточном звероводстве, где успех спаривания, по вполне понятным причинам, имеет большое значение. Эта методика взята на вооружение зарубежными кинологами, причем в США, Германии и ряде других стран сука направляется на вязку только после того, как будет выяснен характер течения ее полового цикла, определен срок собственно течки, то есть по сути дела овуляции.
У нас в охотничьем собаководстве Санкт-Петербурга робкие шаги по применению метода влагалищных мазков делаются пока только в секторе русского охотничьего спаниеля, но они уже дали свои результаты: благодаря точно определенным срокам, спаривания молодых «не развязанных» собак (сук и кобелей) прошли успешно.
Под половым циклом понимают обычно весь комплекс процессов, протекающих в генеративной системе самки млекопитающих, в нашем случае суки. После наступления половой зрелости в яичниках происходит интенсивное развитие фолликулов, причем рост и созревание их идет как бы волнами, что соответствует ритмике половых циклов данного животного. Половой цикл можно условно разделить на два периода — покоя и половой активности, второй в собаководстве получил название «пустовка». Она продолжается 25-27 дней и распадается на три фазы: предтечки, течки и послетечки. Все они характеризуются определенными как морфофизиологическими изменениями в генеративной системе (яичниках, матке, влагалище), так и особенностями поведения.
Для практических задач собаководства наибольший интерес представляют циклические изменения, происходящие во влагалище. Период пустовки отличается усиленным размножением клеток влагалищного эпителия, ороговением и отторжением его поверхностных слоев. Клеточные элементы, их количество и соотношение позволяют точно установить фазу полового цикла. На первый взгляд все сказанное может показаться излишне сложным, тем более, что существуют традиционные методы определения начала пустовки, времени вязки и признаков окончания всего периода половой активности. Имеющиеся в литературе рекомендации также предельно просты — вязать суку следует после кровянистых выделений, на 9-14-й день от начала пустовки. В связи с тем, что вяжут собаку чаще всего на 3-ю или 4-ю пустовку, первые две или три хозяин оставляет без внимания и активные действия его начинаются лишь тогда, когда уже имеется направление к партнеру. К сожалению, далеко не всегда это мероприятие заканчивается успешно, хотя по всем внешним показателям визит был нанесен вовремя. Более того, зачастую и вязку удается произвести, несмотря на отчаянное сопротивление собаки. А затем события могут развиваться двояко: в одном случае сука остается пустой, в другом — на 20-22 день она начинает проявлять явную заинтересованность по отношению к «дворовым добровольцам» и мне известны случаи, когда суки, повязанные в срок, зачастую с помощью опытного «инструктора», приносили помет в результате случайной вязки на 20-й день пустовки, причем породную принадлежность щенков установить было невозможно.
Успешный результат вязки имеет место лишь тогда, когда встреча партнеров происходит в период собственно течки, или, пользуясь принятой терминологией, эструса, то есть в момент овуляции — выбрасывания яйцеклеток из зрелых фолликулов. У собак продолжительность овуляции колеблется (в зависимости от породы) от 4 до 9 дней, то есть в сроки собственно течки. Созревшие яйцеклетки в это время находятся в яйцеводе, где и происходит встреча со сперматозоидами. Овуляция, то есть выброс яйцеклеток, по срокам может отличаться заметной индивидуальностью. Причем эти отклонения от общего правила могут быть нормальным явлением для конкретного животного и даже для поколений его потомков по материнской линии. Вероятно, может иметь место и «породная» изменчивость и географическая, и т.п.. Просто надо четко представлять себе характер течения полового цикла своей собаки. Наряду с такими в общем-то безобидными отклонениями могут быть и патологические отклонения, например, «ложная течка», не сопровождающаяся разрывом фолликулов и выбросом яйцеклеток, то есть отсутствие овуляции. Показательно, что все внешние проявления пустовки сохраняются, кровянистые выделения сменяются почти бесцветными, в свой срок сука становится игривой и благосклонной к кобелям, отводит хвост при надавливании на круп, в некоторых случаях она даже допускает садки. Естественно, что щенков в этом случае ожидать нечего, поскольку никакого оплодотворения произойти не может. Нередко вся вина за пустую вязку ложится на кобеля, его начинают остерегаться, не включать в план племенного использования.
Всех этих неприятностей можно попытаться избежать, если детально изучить особенности половых циклов маточного поголовья породы. И начинать надо с первой пустовки. Самая первая течка может проходить нетипично, она может быть «ложной» или «раздробленной». В этих случаях за коротким эс-тральном кровотечением (2-5 дней) наступает перерыв продолжительностью до двух недель, а затем кровянистые выделения возобновляются и цикл проходит нормально.
Исследовать эстральный цикл, уловить какие-то отклонения, обнаружить патологические изменения в характере течения полового цикла суки и поможет методика влагалищных мазков. Мне бы очень хотелось заинтересовать ею как ответственных за ведение племенной работы с породой, так и заводчиков.
Сама процедура получения влагалищного мазка несложна и доступна каждому владельцу собаки. Для того, чтобы получить препарат влагалищного мазка, необходимо иметь:
1. Дистиллированную воду 2-3 литра.
2. Несколько глазных пипеток с закругленными концами.
3. Предметные стекла (30 штук).
4. Чашки Петри или чашки Коха (можно обойтись и небольшими блюдцами).
5. «Салазки» — 2 стеклянные трубочки диаметром 3- 4 мм, длиной 6-7 см, соединенные между собой с обоих концов резиновыми трубками, диаметром, позволяющим плотно надеть их на стеклянные трубки, длиной 4-6 см. Салазки кладутся на дно чашек Петри (или Коха) или блюдца. Салазки можно успешно заменить двумя спичками, уложенными на дно чашек или блюдца параллельно друг другу. На салазки или спички кладутся предметные стекла.
6. Фильтровальная бумага.
7. Стаканчик (высотой с длину предметного стекла) для ополаскивания, окрашенного препарата.
8. Краситель.
а) Эозиновокислый метиленовый синий по Май-Грюнвальду или по Лейшману (готовый раствор).
б) Раствор Гимза (метиленовый синий и эозин).
Готовые растворы этих красителей бывают в лабораториях: медицинских или биологических, где красят мазки крови или влагалищные мазки.
9. Стеклянные сосуды (маленькие бюксики или стаканчики) для красителя и дистиллированной воды.
ТЕХНИКА ПОЛУЧЕНИЯ И ОКРАСКИ МАЗКОВ.
1. В чашке Петри (или Коха) или на дне блюдца, на «салазки» или на спички положить чисто вымытое и обезжиренное сухое предметное стекло.
2. В чистую пипетку набрать S ее объема дистиллированной воды.
3. Ввести пипетку во влагалище суки (по возможности не касаясь его наружного края), выпустить воду и сразу набрать жидкость из влагалища в пипетку («промыть» влагалище).
4. Содержимое пипетки сразу же нанести на середину приготовленного предметного стекла.
5. Высушить мазок на воздухе, прикрыв от пыли чашку Петри (или Коха) или блюдце фильтровальной бумагой.
6. Набрав в отдельную пипетку краситель, нанести 5-6 капель на высушенный мазок и оставить на 3-5 минут.
7. Нанести на мазок 5-6 капель дистиллированной воды так, чтобы мазок вода покрывала полностью, оставить еще на 5-10 минут, затем слить раствор и погрузить стекло с окрашенным мазком на очень короткий срок (до 1-1,5 мин.) в стаканчик, доверху наполненный дистиллированной водой. Аккуратно обсушить между листками фильтровальной бумаги.
8. Маркировать мазок. На краю (любом, т.к. посередине располагается мазок) предметного стекла написать: № препарата, кличку собаки, дату и порядковый день пустовки. Надпись лучше выполнить тушью и залить клеем БФ.
Окраска удается лучше на совсем свежих мазках, но вполне допустима окраска мазков и 2-х — 4-х дневной давности.
Препарат готов, рассматривать его следует под микроскопом при 10-и -40-а кратном увеличении.
На окрашенном препарате (по Май-Грюнвальду или Лейшману) «чешуйки» окрашены в красноватый цвет, цитоплазма эпителиальных клеток — в голубоватый цвет, а ядра — в синий. Лейкоциты окрашиваются в синий, почти фиолетовый цвет.
При окраске по Гимза: «чешуйки» темно-синего цвета, цитоплазма — голубая, ядра — синие. Лейкоциты — темно-синие.
Интенсивность окраски клеточных элементов может зависеть от свежести красителя.
Позволю себе коротко остановиться на отличиях цитологической картины на разных стадиях полового цикла.
Как уже говорилось выше, весь цикл составляет четыре стадии или фазы, из которых нас интересует лишь три — предтечка, течка и послетечка (проэструс, эструс и метаэструс), четвертая стадия — покой — составляет промежуток между двумя пустовками и характеризуется полной инактивностью половой системы.
1. Фаза предтечки, или подготовительная фаза длится от 9 до 11 дней и характеризуется кровянистыми выделениями, иногда обильными, в яичниках собаки в это время происходит интенсивное развитие фолликулов. Собака игрива, внимательно исследует все мочевые метки собак, постоянно присаживается, оставляя буквально капельки мочи, содержащие специфический запах, привлекающий кобелей. В крови быстро растет и достигает пика за 1-2 дня до конца проэструса концентрация эстрогена. Картина влагалищного мазка в начале фазы характеризуется большим числом округлой формы эпителиальных клеток с довольно крупными ядрами. В конце фазы (9-10 день от начала пустовки при нормальном половом цикле) — в мазке появляются отдельные ороговевшие безъядерные многоугольные клетки, так называемые «чешуйки».
2. Фаза собственно течки длится от 2 до 10 дней и характеризуется почти бесцветными или бледно розовыми выделениями из влагалища. В этой фазе происходит разрыв зрелых фолликулов и выбрасывание яйцеклеток, которые через несколько часов попадают в яйцеводы, где задерживаются до 7 — 8 дней; здесь же происходит встреча со сперматозоидами (в случае вязки) и оплодотворение. Наиболее высокой способностью к оплодотворению яйцеклетки обладают в первые 5-6 дней. В крови резко повышается уровень гормона эстрадиола, что приводит к увеличению количества во влагалище полностью ороговевших эпителиальных клеток — «чешуек». Оптимальным сроком для вязки следует считать тот день, когда на препарате влагалищного мазка подавляющее большинство клеточных элементов представлено чешуйками.
3. Фаза послетечки или торможения занимает в половом цикле около 10-14 дней и постепенно переходит в стадию полного генеративного покоя. В этой фазе еще могут иметь место выделения из влагалища, они, как правило, бесцветны, но могут быть и бледнорозо-выми, сука становится спокойной и агрессивной по отношению к кобелям. На месте лопнувших фолликулов образуются желтые тела, вырабатывающие гормон прогестерон, подавляющий овуляцию. Неоплодотворенные яйцеклетки разрушаются и погибают. Влагалищный мазок демонстрирует незначительное количество «чешуек» обилие молодых эпителиальных клеток, округлых с крупными ядрами. Хорошим показателем этой фазы служит нарастающее число лейкоцитов.
Таким образом, картина влагалищного мазка достаточно четко характеризует и отражает физиологическое состояние суки и ее готовность к спариванию. Она также позволяет оценить по ряду характеристик особенности репродуктивных циклов семейств, и возможность зачатия, выявить причины «ложной беременности», малой плодовитости и т.п.
